◆ 熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測（含內參）                         服務編號：FW04

一、熒光定量PCR原理簡介

實時熒光定量PCR是利用熒光染料（具有雙鏈DNA親和性）或熒光標記短核苷酸探針（利用Taq酶的5’→3’外切酶活性）的熒光活性，在PCR 反應的的過程中，每個循環收集一個熒光強度信號。隨著PCR 反應產物量的增加，熒光信號強度也等比例增強。RT-qPCR反應完成后通過對PCR 擴增反應中每一個循環后熒光信號強度變化的監測可得到一條熒光擴增曲線圖，進一步可計算出相對應的產物量的變化，從而實現對起始模板定量及定性的分析。

二、服務內容

1、從動物細胞、人或動物組織、細菌、植物、血清、土壤等樣品中提取核酸

2、對核酸進行濃度及純度分析

3、熒光定量PCR檢測

（1） 引物和探針的設計與合成

（2） 絕對定量和相對定量的選擇

（3） 探針法和染料法的選擇

（4） 熒光定量PCR儀對目的基因的檢測

（5） 數據統計和分析

4、預實驗服務：根據客戶提供的目的基因序列或NCBI序列號提供客戶引物和探針，并篩選出最優化的引物和探針。

5、正式實驗服務：根據預實驗篩選的引物和探針對所用樣品進行熒光定量PCR的檢測，并對結果進行統計和分析。

5、免費進行相對熒光定量PCR內參基因的檢測

三、樣品要求（樣品處理及保存見附件）

1、細胞＞1×10⁶；組織＞50 mg；細菌濕重＞50 mg；植物＞100 mg；血清＞50 µl；土壤干重＞200 mg

2、樣品蛋白濃度＞1 mg/ml，蛋白量＞200 µg/樣品

四、收費標準

四、客戶提供材料

1、新鮮或正確保存的樣品（-80保存或加入Trizol后-20保存）

2、目的基因序列或NCBI序列號

3、陽性對照樣品（盡量提供）

4、相關文獻（可選）

五、提交給客戶結果

1、預實驗引物篩選結果（相同樣品不同引物溶解曲線圖）

2、正式實驗結果（所用樣品溶解曲線圖，Ct值，拷貝數（絕對定量），擴增效率，標準曲線（絕對定量），標準品質粒和菌株（絕對定量），樣品統計分析結果）

3、引物，探針及其序列

4、完整實驗報告

六、服務項目說明

1、選擇部分樣品進行預實驗，參考目的基因2-3個引物進行預實驗；

2、向客戶反饋預實驗結果，等待客戶確認預實驗結果后確定是否進行正式實驗

3、請您提供正確的基因序列或NCBI序列號以供引物設計和探針設計，也可以根據客戶提供的引物和探針序列直接合成后進行實驗。引物由我們免費進行合成，探針合成的費用請參照“收費標準”

4、建議提供目的基因陽性表達樣品（DNA，cDNA、有陽性表達的細胞或組織、商品化的陽性對照產品等）作為陽性對照。陰性對照如無特殊說明均為無模板對照

5、免費內參檢測為：beta-actin，beta-tubulin，gapdh，如果需要其它基因作為內參需要提前說明并按樣品數目收取費用，參照“收費標準”

6、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動預實驗

7、熒光定量PCR特殊要求請咨詢