處理及保存(極為重要)
1、懸浮細胞樣品:把細胞及培養液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
2、貼壁細胞樣品:
2.1 胰酶消化:用胰酶將細胞消化后,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
2.2 細胞刮子收集細胞:對于某些蛋白(即對胰酶比較敏感或者實驗特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進行WB檢測),直接用細胞刮子刮下細胞,收集到EP、15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
3、動物組織樣品:取下合適的動物或者人的組織樣品后用預冷的PBS或者生理鹽水漂洗,盡量除盡殘留血液,用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大。ㄒ罁䦟嶒災康男枰M行調整),用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好,于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
4、植物樣品:取得待測植物樣品后,用蒸餾水把泥土漂洗干凈,用濾紙把多余水分吸取干凈,分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
5、細菌樣品:細菌培養完成后,10000rpm離心5min收集細菌,加入PBS吹打,10000rpm離心5min,棄去上清;反復3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。
6、若要檢測磷酸化蛋白,請在3個月內進行。長時間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。
7、提取胞漿、胞核蛋白的樣品應盡量采用新鮮樣品,凍存樣品提取的胞核蛋白可能會減少。
8、血液樣品(血漿中蛋白):3000rpm離心20min后收集上清,分裝后于-80度或者液氮凍存待用。3個月以內檢測。
9、長距離運送樣品時采用干冰或者液氮。
10、樣品的實際需要量請打電話咨詢。
抗體保存及使用
應嚴格按照抗體說明書進行保存,避免出現不必要的麻煩。在-20度保存呈液體狀態的抗體請不要分裝。新購抗體要在2-3月以內進行WB檢測等實驗,以驗證抗體的有效性。一般新購抗體有非特異條帶等問題出現,2-3個月內沒有反饋給抗體公司,抗體公司將不再受理投訴。 |