天德悅(北京)生物科技有限責任公司
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        010-80117836
        276385203@qq.com

         
        Western Blot
        RT-PCR
        IP&Co-IP
        ChIP
        載體構建和蛋白表達
        EMSA
        樣品處理
        小鼠多克隆抗體制備
        小鼠單克隆抗體制備
        (單)雙熒光素酶檢測
        細胞相關實驗服務1
        細胞相關實驗服務2
        CRISPR/Cas9介導基因敲除細胞系建立
        ips細胞誘導,鑒定和定向分化
        細胞寄送處理注意事項
        (單)雙分子熒光互補實驗

         
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        關于我們
        公司名稱:天德悅(北京)生物科技有限責任公司
        公司網址:www.joaniereynolds.com                                            Email: 276385203@qq.com            郵編:102299
        公司地址:北京市昌平區科技園區振興路36號院2號樓2層203            TEL:+8610-80117836                        

        ◆免疫熒光

        一、服務內容

        1、對細胞內源性蛋白的表達進行表達量和初步亞細胞定位觀察

        2、對在哺乳動物細胞中過表達的外源性蛋白進行表達量和初步亞細胞定位觀察

        3、對細胞內兩種內源性蛋白進行共定位觀察

        4、對在哺乳動物細胞中過表達的兩種外源性蛋白進行共定位觀察

        5、細胞內源性蛋白和外源性過表達蛋白精確亞細胞定位觀察(包括細胞膜、線粒體、溶酶體、核膜、核仁等多種細胞器)

        6、基本沉默效果檢測

        二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

        1、細胞>1×107;

        2、特殊培養條件的細胞請提供具體培養方法、血清和相關生長因子等

        三、服務特點

        1、摸索每個蛋白合適的抗體稀釋度

        2、精確觀察所表達蛋白亞細胞定位情況

        3、精確觀察兩種蛋白在細胞內是否有共定位

        四、收費標準

        服務項目

        收費標準¥

        實驗周期

        預實驗

        細胞培養

        1500/細胞系

        待定

        細胞轉染

        3000/樣品

        1

        一抗濃度摸索

        1000/抗體

        1-2

        多種一抗混合孵育條件摸索

        2000/樣品

        2-3

        熒光顯微鏡拍照

        250/片子

        2

        正式實驗

        細胞培養

        1500/細胞

        待定

        細胞轉染

        3000/樣品

        1

        一抗單染

        500/樣品

        1

        一抗混合染色

        1000/樣品

        1

        熒光顯微鏡拍照

        250/片子

        2

        激光共聚焦顯微鏡觀察共定位

        500/片子

        2

        數據分析

        300/片子

        1

        五、客戶提供材料

        1、待檢測細胞系和目的蛋白信息(內源性蛋白)

        2、待轉染質粒和菌株,以及目的蛋白信息(外源性蛋白)

        3、目的蛋白一抗

        4、陽性對照樣品(盡量提供)

        六、提交給客戶結果

        1、免疫熒光原始圖片

        2、兩種蛋白共定位圖片

        3、完整實驗報告

         

         

        ◆串聯親和純化技術(tandem afinity purification,TAP)篩選相互作用蛋白

        將帶有TAP標簽的融合蛋白在細胞中表達,并與內源相互作用蛋白形成復合物,細胞裂解后經FLAG標簽親和層析柱純化,蛋白AFLAG抗體特異結合,從而使含有標簽的復合物得到第一次純化。將純化后的含有靶蛋白的復合物與層析柱分離,并經過含有HA標簽抗體的親和層析柱進行第二次純化,靶蛋白上HA標簽可與HA單抗結合,從而使含有HA標簽的復合物得到第二次純化。再加入過量螯合劑后與親和層析柱分離使含有靶蛋白的復合體得到分離純化,經聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),復合物中的各個蛋白被分開,切膠、胰酶消化后,即可通過質譜鑒定復合物中與靶蛋白相互作用各個蛋白的氨基酸序列。

        一、服務內容

        1、TAP標簽的融合蛋白表達載體的構建

        2、細胞內源相互作用蛋白的分離

        3、質譜鑒定復合物中各個蛋白的氨基酸序列

        4、相互作用蛋白細胞內驗證(CoIP

        5、相互作用蛋白細胞外驗證(GST pulldown

        二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

        1、相關基因載體或序列

        2、待檢測細胞系

        三、服務特點

        1、可得到大量含靶蛋白的復合體;

        2、蛋白表達及與復合物的結合都接近生理水平,篩選的相互作用蛋白陽性率高;

        3、TAP兩步親和純化方法,提高了純化產物的特異性。

        四、收費標準

        服務項目

        收費標準¥

        實驗周期

        TAP親和純化互作篩選互作蛋白

        TAP標簽質粒的構建(FLAG,HA雙標簽)

        6000/基因

        3-4

        TAP標簽質粒的構建(其它標簽)

        請詢價

        2

        TAP融合蛋白純化

        6000/mg

        2

        細胞內源互作蛋白的篩選

        30000/樣品

        2

        組織內源互作蛋白的篩選

        40000/樣品

        2

        互作蛋白的質譜鑒定

        2500/樣品

        2

        CoIP驗證蛋白互作

        8300/目的蛋白

        3-4

        Pull down驗證蛋白互作

        請參考Pull down目錄

        4-6

        五、客戶提供材料

        1、相關基因信息和細胞系培養條件

        2、相關質粒信息和質粒> 100 μg

        3、相關文獻(可選)

        六、提交給客戶結果

        1、TAP標簽質粒和甘油菌

        2、質粒測序結果和堿基豐度圖

        3、TAP融合蛋白

        4、互作蛋白鑒定結果(質譜結果)

        5、CoIP結果(蛋白純化SDS-PAGE電泳圖)

        6、Pull down (蛋白純化SDS-PAGE電泳圖)

        七、服務項目說明

        客戶要求加可曝光marker的,需事先說明,并按照可曝光項目收費

         

         

        GST pulldown體外驗證蛋白相互作用

        實驗原理

        將目的基因構建至GSTGlutathione S transferase)標簽或者His載體上,通過誘導表達出GST標簽或者His標簽融合探針蛋白。通過GST標簽將融合探針蛋白與層析柱上或固相化載體上的GTHGlutathione)親和或者Ni填料親和。當與融合探針蛋白有相互作用的靶蛋白通過層析柱或固相載體時就可被吸附而分離。從而在體外驗證兩個蛋白是否有相互作用,或者尋找可能與目的蛋白有相互作用的靶蛋白。

        一、服務內容

        1、GST標簽或者His融合蛋白表達載體的構建和表達驗證

        2、驗證融合探針蛋白與未知(或靶)蛋白間的新的相互作用

        3、驗證探針蛋白與已知蛋白質間可疑的相互作用

        4、免費進行胞漿蛋白內參檢測(胞核蛋白內參需收取費用)

        二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

        1、融合探針基因和靶基因載體>10μg,或甘油菌(-20攝氏度保存時間不超過一年)

        2、靶細胞>1×107

        三、服務特點

        1、摸索每個基因合適的誘導表達條件

        2、優化靶蛋白與融合探針蛋白共孵育條件

        3、優化靶細胞裂解條件及與融合蛋白蛋白共孵育條件

        四、收費標準

        服務項目

        收費標準¥

        實驗周期

        融合探針載體和靶基因載體構建

        請參考載體構建服務目錄

        3-4

        融合探針蛋白和靶蛋白誘導表達

        4000/mg

        3-4

        靶細胞裂解條件摸索

        3000/細胞

        2-3

        Pull down驗證蛋白互作

        15000/目的蛋白

        3-4

        五、客戶提供材料

        1、新鮮或正確保存的蛋白樣品(直接進行pull down

        2、探針基因和靶基因相關序列信息

        3、靶細胞系培養條件

        4、陽性對照樣品(盡量提供)

        5、相關文獻(可選)

        六、提交給客戶結果

        1. 完整實驗報告 (包括具體實驗步驟和實驗圖片等)

        2. 完整基因序列的質粒>10μg和載體甘油菌株

        3. 完整測序報告和序列堿基圖

        4、WB實驗曝光結果(膠片及掃描圖)

        5、IOD值分析報告(可選)

        七、服務項目說明

        客戶要求加可曝光marker的,需事先說明,并按照可曝光項目收費

         

         

        ◆流式細胞術細胞檢測與分選

        流式細胞術(flow cytometry)是利用流式細胞儀(flow cytometer)對對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒(如微球,細菌,小型模式生物等)逐個進行快速定量分析、多參數分析和分選的現代細胞分析技術。

        一、服務內容

        1、特定類型細胞檢測和分析

        1)檢測藥物處理和蛋白表達對細胞周期調控影響

        2)檢測藥物處理和蛋白表達對細胞凋亡

        3)檢測藥物處理和蛋白表達對細菌生長、抑制和毒力等的影響

        2、對表達特定蛋白細胞進行分選

        1)單標記細胞檢測和分選

        2CD4/CD8陽性T細胞等多標記細胞的檢測和分選

        3)其它多標記細胞的檢測和分選

        二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

        1、細胞>1×107;新鮮血液>10 mL

        2、細菌單菌落或菌液

        三、服務特點

        1、豐富的抗體單標記和多標記經驗

        2、短時間內可進行大量細胞的檢測和分選

        3、專業的數據處理與分析

        四、收費標準

        服務項目

        收費標準¥

        實驗周期

        流式細胞術檢測

        細胞周期檢測

        400/樣品

        2-3

        細胞凋亡檢測

        300/樣品

        2-3

        細菌生長和抑制檢測

        300/樣品

        2-3

        流式細胞術分選

        單標記細胞檢測和分選

        800/樣品

        3-4

        多標記細胞檢測和分選

        請詢價

        3-4

        五、客戶提供材料

        1、細胞>1×107和特殊細胞培養條件

        2、目的蛋白一抗

        3、陽性對照樣品(盡量提供)

        4、相關文獻(可選)

        六、提交給客戶結果

        1、完整實驗報告(包括一維單參數直方圖,二維點狀圖和圈門后分析圖等)

        2、分選后的細胞(具體細胞數根本細胞種類而不同)

         

         
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